1实验
1.1仪器与试剂配备
DAD检测器的1100高效液相色谱仪（Agi2lentTechnologies），ZORBAXBonus2RP液相色谱柱（150mm×4.6mm×5μm，AgilentTechnologies），EnviTM2ChromP固相萃取柱（6mL，500mg，Su2pelco公司），CNM2MST22氮吹仪（长沙中讯电子工程研究所），pH计（HORIBA公司），NDO2400恒温烘箱（上海爱朗仪器有限公司）。苯胺，4，4'2亚甲基二苯胺，2，62二氨基甲苯，2，42二氨基甲苯，1，52二氨基萘，4，4'2二氨基二苯醚，3，3'2二甲基联苯胺，纯度均>99.0，购于美国Dr.Ehrenstorfer公司。乙腈，甲醇为色谱级，购于美国Sigma公司。氢氧化钠为分析纯，购于北京化工厂。
1.2标准溶液的配制
标准储备液：称取目标分析物各10.0mg（精确到0.1mg），使用乙腈稀释并转移至50mL棕色容量瓶中，乙腈定容，充分混匀，得到浓度为200mg/L的标准储备液，4℃下避光保存，备用。
混合标准工作液：分别准确量取标准储备液各5.0mL于50mL棕色容量瓶中，乙腈定容至刻度，得到浓度为20mg/L的混合标准工作液，4℃下避光保存，备用。依次稀释混合标准工作液，得到浓度为0，0.050，0.10，0.50，1.0，2.0，5.0和10mg/L混合标准工作液。
1.3仪器测定条件流动相为水和乙腈混合物，流动相梯度洗脱条件为：0～5min，水体积分数为90，乙腈体积分数为10，5～14min，水由90变为35，乙腈由10变为65.流速1mL/min；检测波长为240nm和280nm（针对3，3'2二甲基联苯胺）；柱温30℃；进样量10μL.
1.4样品前处理
1.4.1迁移实验
将未接触食品的复合塑料包装袋用去离子水冲洗干净，向包装袋中添加合适体积的去离子水，添加水的体积不少于100mL，并将袋口热封后放入玻璃杯中，再将玻璃杯放入恒温干燥箱中，在90℃下恒温1h.然后取出包装袋，冷却至室温后，取出包装袋中的浸泡液到锥形瓶中做进一步处理。
1.4.2固相萃取操作
用1mol/L氢氧化钠溶液调节浸泡液的pH值至9，准确量取100mL浸泡液通过EnviTM2ChromP固相萃取柱富集。富集前固相萃取柱依次使用乙腈，去离子水（将其pH调至9）活化。浸泡液经萃取柱自然流出，加入1mL乙腈进行清洗，抽干，清洗液去掉，再加入4mL乙腈洗脱液，流速约为1mL/min，抽干，收集乙腈洗脱液，并加入1mL水混合均匀，取其中1mL混合液置于样品瓶中，待上机测定。
2结果与讨论
2.1固相萃取
2.1.1固相萃取柱的选用研究了以硅基为主体填料的C18固相萃取柱和以高聚物苯乙烯二乙烯基苯为填料的EnviTM2ChromP固相萃取对水体中芳香胺的吸附能力。将100mL的自制水样（浓度为0.1mg/L，pH=9），分别过XDB2C18柱和EnviTM2ChromP柱，然后收集流出液进行液相色谱分析。实验发现与C18柱相比，En2viTM2ChromP柱对水体中的初级芳香胺能够完全吸附，这说明高聚物填料比硅胶键合相填料对水体中的胺类极性物质具有更好的吸附性。
2.1.2pH值对固相萃取吸附能力的影响
由于初级芳香胺均带有氨基，是一类呈弱碱性的极性化合物，溶液的pH值对芳香胺的电离性能具有重要影响。实验研究了水体pH值分别为8，9，10时EnviTM2ChromP柱对芳香胺的吸附性见表1.由表表1水体pH值对固相萃取回收率的影响Tab.1EffectofpHofwaterontherecoveryrateofSPE分析物（0.1mgL-1）回收率/pH=8pH=9pH=102，62二氨基甲苯8399752，42二氨基甲苯789672苯胺6899611，52二氨基萘88104694，4'2二氨基二苯醚7798684，4'2亚甲基二苯胺8199783，3'2二甲基联苯胺7110779包装工程PACKAGINGENGINEERINGVol.31No.32010.02501可知将水体pH值调到9时EnviTM2ChromP固相萃取柱对目标分析物具有较理想的吸附特性。
2.1.3洗脱溶剂和洗脱体积
研究了甲醇，乙腈和甲醇与乙腈混合物（体积比1：1）3种洗脱溶剂的洗脱效果。芳香胺浓度均为0.1mg/L的100mL自制水体用3根EnviTM2ChromP柱萃取，分别用5mL的甲醇，乙腈和甲醇乙腈混合液进行洗脱，实验表明乙腈的提取效果最好，甲醇的提取效果最差。研究了乙腈的洗脱体积对目标分析物洗脱效果的影响。使用7mL乙腈分7次洗脱，每次1mL洗脱，得到的洗脱液进行液相色谱测定前1mL乙腈洗脱液中没有目标分析乙腈体积对芳香胺的洗脱效果Fig.1Elutingeffectofacetonitrileonthearomaticamines物，到第5mL洗脱液中目标分析物含量较少，因此实验选用前1mL乙腈洗脱液不收集，然后采用4mL乙腈便可基本将绝大部分芳香胺洗脱。
2.2氮吹为了提高芳香胺的浓缩倍率，文献中报道需要将洗脱液进行氮吹浓缩。由于苯胺等芳香胺物质沸点较低，直接氮吹容易使芳香胺损失，因此需要在洗脱液中加入酸，使芳香胺尽量离子化来降低挥发，然后定容后又需用碱中和其中的酸。这些步骤不仅繁琐，而且也不能确保芳香胺理想的回收率。本实验中将固相萃取中的乙腈洗脱液直接用去离子水定容到5mL后直接进液相色谱分析，省略了繁琐的氮吹浓缩步骤，又确保了样品基质与液相色谱流动相之间的匹配。针对100mL水样，浓缩比例可以达到20倍，目标分析物的方法定量限可达2.5μg/L，已经远低于欧盟2002/72/EC指令[2]中0.02mg/L的检测限量要求。因此本方法中省略氮吹浓缩步骤，不仅简化了样品前处理步骤，确保了芳香胺的回收率，而且方法的定量限也符合欧盟指令的要求。
2.3检测参数优化
2.3.1进样基质对芳香胺分离的影响
分别采用体积比均为1：1的甲醇水溶液，乙腈水溶液和乙腈甲醇混合溶液作为基质配制0.1mg/L芳香胺标准溶液进样分析。实验发现采用甲醇水溶液和乙腈水溶液作为进样基质均能够使各芳香胺获得较好的分离与峰形，两者间峰形和峰面积没有明显差别；而采用乙腈甲醇混合溶液作为基质对2，62二氨基甲苯和2，42二氨基甲苯的色谱峰影响较大，峰形变胖，响应值变小。考虑到与流动相之间的匹配，实验中采用乙腈水溶液作为进样基质。
2.3.2检测波长的选择
通过全波长扫描发现除3，3'2二甲基联苯胺的最大吸收波长为280nm外，其他芳香胺的最大吸收波长为240nm.为了确保检测灵敏度，本方法采用两个检测波长，针对3，3'2二甲基联苯胺选择280nm作为检测波长，其他芳香胺采用240nm作为检测波长。
2.4方法性能评价
2.4.1线性范围针对目标分析物，仪器检测线性范围为0.05～10mg/L，按固相萃取浓缩20倍计，对应方法检测线性范围为0.0025～0.5mg/L，各目标分析物的线性相关系数均大于0.9996.陈志锋等高效液相色谱法测定复合塑料食品包装中初级芳香胺的迁移量512.4.2方法精密度与回收率分别配制0.02mg/L和0.2mg/L两个浓度水平的标准水样，按照方法操作程序，平行测定6次，计算各个芳香胺的检测重复性和回收率。方法回收率在95～107之间，相对标准偏差在7.6以内，见表2.表2方法回收率，精密度与检测限Tab.2Precision，recoveryrate，anddetectionlimitofthemethod分析物浓度/（mgL-1）
RSD（n=6）/回收率/定量限/（μgL-1）检测限（S/N=3）/（μgL-1）2，62二氨基甲苯0.020.201.81.3101992.50.82，42二氨基甲苯0.020.202.52.796982.50.8苯胺0.020.200.61.81031002.50.81，52二氨基萘0.020.204.53.11061022.50.84，4'2二氨基二苯醚0.020.200.92.195982.50.84，4'2亚甲基二苯胺0.020.201.71.996992.50.83，3'2二甲基联苯胺0.020.206.77.61071022.50.82.4.3方法定量限与检测限取线性范围下限为该方法的定量限，初级芳香胺的仪器定量限为0.05mg/L，对应方法定量限为2.5μg/L（按照浓缩20倍计算），仪器检测限为0.017mg/L（S/N=3），对应方法检测限为0.8μg/L.
2.5实际样品检测
从市场和工厂里分别购买了8种不同品牌复合食品包装袋，检测结果表明8个样品中检出含有4，4'2亚甲基二苯胺的样品共有2个，浸泡液浓度分别为0.24mg/L和0.07mg/L，折算出该物质的迁移量分别0.008mg/dm2和0.003mg/dm2。
|
